培養(yǎng)基pH值變化迅速
1.培養(yǎng)箱CO2分壓設(shè)置錯誤 根據(jù)培養(yǎng)基中NaHCO3的濃度增大或降低培養(yǎng)箱CO2的分壓，NaHCO3濃度為2.0-3.7g/L時，應相應地使用5%-10%的CO2分壓
2.細胞培養(yǎng)瓶瓶蓋過緊 將瓶蓋旋松1/4圈
3.碳酸氫鹽緩存系統(tǒng)緩沖能力不足 加入HEPES緩沖液，使其終濃度為10-25mM
4.培養(yǎng)基中鹽含量不正確 CO2平衡環(huán)境中使用以Earle平衡鹽為基礎(chǔ)的培養(yǎng)基，大氣條件下使用以Hanks平衡鹽為基礎(chǔ)的培養(yǎng)基
5.細菌、酵母或真菌污染 將細胞和培養(yǎng)基滅菌處理后丟棄
細胞無法在培養(yǎng)器皿上貼壁生長
1.細胞消化過度 縮短消化時間或減少用量
2.支原體污染 隔離細胞，檢測是否感染支原體；清洗通風廚和培養(yǎng)箱，如細胞被污染，滅菌處理后丟棄
3.培養(yǎng)基中無附著因子 如果使用的是無血清配方，應確保含有附著因子或者使用經(jīng)過包被的培養(yǎng)板
懸浮細胞聚集成團
1.存在鈣離子和鎂離子 用不含鈣離子和鎂離子的平衡鹽溶液清洗細胞，輕輕吹打細胞，使其形成單細胞懸液
2.支原體污染 隔離細胞，檢測是否感染支原體；清洗通風廚和培養(yǎng)箱，如細胞被污染，滅菌處理后丟棄
3.蛋白水解酶消化過度導致細胞裂解、DNA釋放 用0.001%DNA酶I處理細胞；用PBS沖洗后再接種到新培養(yǎng)基中
細胞生長緩慢
1.培養(yǎng)基或血清改變 比較不同培養(yǎng)基配方中葡萄糖、氨基酸及其他成分有無差異；通過生長實驗比較新老批次血清有無差異；增大細胞初始接種密度；使細胞逐步適應新的培養(yǎng)基
2.必需生長促進成分（如L-或生長因子）耗竭、缺乏或分解 去除原培養(yǎng)基，加入新鮮培養(yǎng)基；向培養(yǎng)基中添加生長促進成分（如L-）
3.輕度細菌或真菌污染 在不添加抗生素的條件下進行培養(yǎng)，如細胞被污染，滅菌處理后丟棄
4.時間存儲不當 血清應于-5℃至-20℃下儲存；培養(yǎng)基應于2℃~8℃下避光儲存；盡量減少血清和培養(yǎng)基見光時間
5.細胞初始接種密度低 增大活細胞接種密度
6.細胞衰老、老化 將老化細胞丟棄，取用代數(shù)較少的細胞
7.支原體污染 隔離細胞，檢測是否感染支原體；清洗通風廚和培養(yǎng)箱，如細胞被污染，滅菌處理后丟棄
細胞死亡
1.培養(yǎng)箱中無CO2 監(jiān)測培養(yǎng)箱中CO2使用速度以便確定及時更換氣瓶；經(jīng)常檢測管路連接處是否漏氣；不要頻繁開啟培養(yǎng)箱門
2.培養(yǎng)箱內(nèi)溫度有波動 監(jiān)測培養(yǎng)箱內(nèi)溫度，及時校正
3.使用抗生素達到毒性濃度 減少抗生素的用量；使用無血清培養(yǎng)基時，抗生素濃度應降低至1/10
4.細胞復蘇或凍存時受到損傷 取用新的細胞
5.培養(yǎng)基的滲透壓不合適 檢查*培養(yǎng)基的滲透壓。大多數(shù)哺乳動物細胞可耐受260~350mOsm/kg的滲透壓，加入某些試劑和藥物后會影響培養(yǎng)基的滲透壓；昆蟲細胞培養(yǎng)基的滲透壓（340~380mOsm/kg）要高于哺乳動物細胞
6.培養(yǎng)基中毒性代謝產(chǎn)物蓄積 去除原培養(yǎng)基，換用新鮮培養(yǎng)基
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