產(chǎn)品名稱：HPT-8細(xì)胞，小鼠飼養(yǎng)層上皮細(xì)胞說明書
產(chǎn)品特點(diǎn)：HPT-8細(xì)胞，小鼠飼養(yǎng)層上皮細(xì)胞說明書上海一研生物相關(guān)產(chǎn)品：乙酰化組蛋白H3抗體 Acetyl-Histone H3（K23） 0.2ml乙酰化組蛋白H3抗體 Acetyl-Histone H3（K18） 0.2ml磷酸化肝細(xì)胞核因子4α抗體 phospho-HNF4 （Ser304） 0.1ml高遷移率核小體結(jié)合蛋白1 HMG14 0.1ml磷酸化組蛋白H3抗體 Phospho-His
產(chǎn)品型號：
更新日期：2021-03-29
訪問次數(shù)：545
HPT-8細(xì)胞，小鼠飼養(yǎng)層上皮細(xì)胞說明書的詳細(xì)資料：
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運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
產(chǎn)品名稱 | HPT-8細(xì)胞，小鼠飼養(yǎng)層上皮細(xì)胞說明書 |
英文名稱 | HPT-8 cells, epithelial cells of mouse feeder layer |
貨號 | EY-X64147 |
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
褐球固氮菌 Azotobacter chrooccum植物桿菌 Lactobacillus plantarum
TYGPN培養(yǎng)基/TYGPN MediumBR250克國產(chǎn)/進(jìn)口
葡萄糖肉浸液肉湯/Dextrose Meat Infusion Broth用于溶血性鏈球菌的增菌培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進(jìn)口
香菇 Lentinula edodes黑曲霉 Aspergillus niger
HUM, 正常人主動脈平滑肌細(xì)胞小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌 Yersinia enterocolitica
JEG-3(人絨毛膜細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
吉丹鏈霉菌 Streptomyces gedanensis小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（EGFP標(biāo)記）
小鼠淋巴瘤細(xì)胞EL4.IL-2
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae戊糖桿菌 Lactobacillus pentosus
SiHa(人頸鱗細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
小鼠腎實質(zhì)細(xì)胞*培養(yǎng)基許旺酵母 Schwanniomyces occidentalis
HPT-8細(xì)胞，小鼠飼養(yǎng)層上皮細(xì)胞說明書核小體結(jié)合蛋白1(抗原)NSBP1(Nucleosome-binding protein 1) 0.5mg
神經(jīng)絲蛋白（抗原）NTP，Neurual thread protein 0.5mg
陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1(人源）OAT-1 (Organic anion transporter 1)human 0.5mg
陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1（大、小鼠同源：人源見bs-0606P）OAT-1 (Organic anion transporter 1)mouse、rat 0.5mg
陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-3(抗原)OAT-3(Organic anion transporter 3) 0.5mg
胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白(多肽)42281 0.5mg
半糖凝集素9（抗原）galectin 9 0.5mg
骨橋蛋白（抗原）OPN(osteopontin) 0.5mg
抑癌基因p16（抗原）P16/CDKN2A (Cyclin-dependent kinase inhibitor-2A) 0.5mg
p21 核分裂抑制因子之一（抗原）p21/WAF1/CIP1 0.5mg
p27(抗原)p27 (cyclin-dependent kinase inhibitor 1B) 0.5mg
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
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