產(chǎn)品名稱：F-actin染色試劑盒（綠色熒光）
產(chǎn)品特點：F-actin染色試劑盒（綠色熒光）的相關(guān)產(chǎn)品：Defensin Beta1 防御素β1抗原 0.5mgDefensin Beta1 防御素β1抗原ENO2 Protein Human 重組人 NSE / ENO2 / Enolase 2 蛋白GFRA1重組大鼠 GFRA1 / GFR alpha-1 蛋白 (Fc 標簽) Protein
產(chǎn)品型號：
更新日期：2024-11-19
訪問次數(shù)：190
F-actin染色試劑盒（綠色熒光）的詳細資料：
產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：
產(chǎn)品英文名稱：F-actin Staining Kit (Green Fluorescence)
產(chǎn)品中文名稱：F-actin染色試劑盒（綠色熒光）
規(guī)格：50 T/300 T/1000 T
貨號：EY-01X8560
用途：僅供科研研究實驗
特點&優(yōu)勢:
• 優(yōu)化的實驗方案，特別適用于甲醛固定與透化處理的組織切片、細胞培養(yǎng)物或無細胞實驗中的F-actins標記，鑒定以及定量需求。
• 的鬼筆環(huán)肽染料 (綠色熒光) (Ex/Em = 490/515 nm)，特異性地結(jié)合F-actins，且兼具比其它熒光素-鬼筆環(huán)肽偶聯(lián)物更強的光穩(wěn)定性。
保存建議:請參閱說明書中各個組分的存儲條件。自發(fā)貨之日起，在推薦溫度下至少穩(wěn)定6個月。
運輸條件:藍冰運輸
背景
鬼筆環(huán)肽（phalloidin），是從一種劇毒磨菇(Amanita phalloides)中分離出來的一種多肽物質(zhì)，屬于毒傘肽類毒素，是一種強烈毒素。它是一種特異性結(jié)合F-肌動蛋白的雙環(huán)肽，因此，使用熒光染料偶聯(lián)的鬼筆環(huán)肽可以非常方便地研究F-actins的分布。在鬼筆環(huán)肽內(nèi)部，半和之間存在不尋常的硫醚橋，可形成內(nèi)環(huán)結(jié)構(gòu)。當pH升高時，硫醚被裂解，鬼筆環(huán)肽喪失對肌動蛋白的親和力。
本產(chǎn)品具有下列特點:
1.操作簡便、快捷。可直接加入到檢測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟。
2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。
3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機溶劑來溶解甲臜產(chǎn)物。
4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進一步生成。
公司正在出售的產(chǎn)品：
Adipo R2(adiponectin receptor 2 0.5mgAdipo R2(adiponectin receptor 2) 脂聯(lián)素受體-2(抗原)
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F-actin染色試劑盒（綠色熒光）CXADR重組小鼠 CXADR 蛋白 Protein
Adipo R2(adiponectin receptor 2 0.5mgAdipo R2(adiponectin receptor 2) 脂聯(lián)素受體-2(抗原)
AGER重組人 AGER / RAGE 蛋白 Protein
FCGR2B Protein Human 重組人 CD32b / FCGR2B 蛋白 (His & AVI 標簽), Biotinylated
IL13RA1 Protein Rat 重組大鼠 IL13RA1 蛋白 (Fc 標簽)
操作步驟：
(一)獲得目的基因
1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。
2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。
(二)構(gòu)建重組表達載體
1、載體酶切:將表達質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。
2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。
(三) 獲得含重組表達質(zhì)粒的表達菌種
1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。
2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。
3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達宿主菌的感受態(tài)細胞。
(四)誘導表達
1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。
2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。
3、取部分液體作為未誘導的對照組,余下的加入IPTG誘導劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。
4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。
5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。
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