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產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱：Human TPO protein

產(chǎn)品中文名稱：重組人促血小板生成素（TPO）

規(guī)格：5 μg/20 μg/100 μg/1 mg

貨號(hào)：EY-01X8678
用途：僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

特點(diǎn)&優(yōu)勢(shì):

標(biāo)簽:無標(biāo)簽

表達(dá)宿主:大腸桿菌

種屬:人

序列:氨基酸序列來源于人源：TPO（Ser22-Leu195）（NP_000451.1）表達(dá)的蛋白片段，N-端帶有 6×His 標(biāo)記。

蛋白長(zhǎng)度：該蛋白質(zhì)的計(jì)算分子量為 19.6 kDa，在還原條件下，蛋白質(zhì)遷移為 20 kDa（SDS-PAGE 分析）。

純度:> 95 % ，使用SDS-PAGE檢測(cè)

采用 LAL 法檢測(cè)，每 1 μg 蛋白質(zhì)中的 EU 含量小于 0.01。

產(chǎn)品形式:該蛋白質(zhì)是由 0.2 µm 過濾溶液凍干而成，含 1X PBS，pH 7.動(dòng)?動(dòng)

背景

促血小板生成素（TPO）是一種糖蛋白，由肝臟、腎臟、骨髓基質(zhì)和其他一些組織產(chǎn)生。血液中的 TPO 水平大多與血小板和骨髓巨核細(xì)胞的豐度呈負(fù)相關(guān)，但多種炎癥或感染狀態(tài)、肝功能衰竭和血液學(xué)紊亂都會(huì)導(dǎo)致該激素的循環(huán)水平意外偏高或偏低。

本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):

 1.操作簡(jiǎn)便、快捷。可直接加入到檢測(cè)平板。在96-孔板中檢測(cè)時(shí),無需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。

2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體

1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測(cè)序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。

(四)誘導(dǎo)表達(dá)

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對(duì)照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實(shí)驗(yàn)組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。

公司正在出售的產(chǎn)品：

Beta-casein( Beta-casein 0.5mgBeta-casein( Beta-casein) β-酪蛋白(抗原)

EREG Protein Human 重組人 Epiregulin / EREG 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

BCHE重組小鼠 BCHE / Butyrylcholinesterase 蛋白 Protein

DDR1 Protein Rat 重組大鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白

APOM重組人 APOM 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

小鼠A(CsA)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat phosphorylated exacellular signal regulated kinase (pERK) ELISA Kit 大鼠0酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(pERK)檢測(cè)試劑盒

humanprolactin,PRLELISAKit 人催乳素(PRL)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanai-myelinaibodyIgA,AMAIgA檢測(cè)試劑盒人抗突變型瓜波形蛋白抗體(MCV)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物同還原酶(aldo-ketoreductase)總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

Humanuridinedipho-sphateglucuronosylansferase2familypolypeptideB4,UGT2B4ELISAKit人二0酸尿核苷葡糖酸基轉(zhuǎn)移酶2家族肽B4(UGT2B4)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠白介素10(IL-10)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠白介素1(IL-1)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4（OCT4）檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠基脲敏感性胺氧化酶（SSAO）檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠腎酶(RNLS)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： RNLS ELISA Kit

Mouse iercellular adhesion molecule 2 (ICAM-2/CD102) ELISA Kit 小鼠細(xì)胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)檢測(cè)試劑盒

Ratcoicoopieleasinghormone,CRHELISAKit 大鼠促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHBsAg乙型肝表面抗原

細(xì)胞β-內(nèi)酰胺酶報(bào)告基因活性生物發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒20次

SheepIerleukin-2receptor,IL-2RELISAKit綿羊白介素2受體(IL-2R)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

重組人促血小板生成素（TPO）BCHE重組小鼠 BCHE / Butyrylcholinesterase 蛋白 Protein

Beta-casein( Beta-casein 0.5mgBeta-casein( Beta-casein) β-酪蛋白(抗原)

APOM重組人 APOM 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

EREG Protein Human 重組人 Epiregulin / EREG 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

DDR1 Protein Rat 重組大鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白