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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

大鼠腹膜間皮分離自腹膜組織；腹膜是存在于高等脊椎動物腹腔中的一層黏膜，主要由間皮細胞構成，藉由結(jié)締組織的支持所形成的一層膜狀組織。腹膜包覆大部分腹腔內(nèi)的器官，能分泌黏液潤濕臟器的表面，減輕臟器間的摩擦。腹腔臟器的血液、淋巴和神經(jīng)組織經(jīng)由腹膜與外界相連；腹膜也具有吸收撞擊保護內(nèi)臟的效果。腹膜（peritoneum）為全身面積最大、配布最復雜的漿膜，由皮及少量結(jié)締組織構成，薄而光滑，呈半透明狀。襯于腹、盆腔壁內(nèi)表面的腹膜稱為壁腹膜（parietal-peritoneum）或腹壁薄層；覆蓋腹、盆腔器表面的部分稱為臟腹膜（visceral-peritoneum）腹膜或腹膜臟層。臟腹膜與壁腹膜互相延續(xù)、移行，共同圍成不規(guī)則的潛在性腔隙，稱為腹膜腔（peritoneal-cavity）。腹膜腔是臟、壁兩層腹膜之間相互移行圍成的潛在性間隙。腹膜腔內(nèi)有少量漿液，在臟器活動時可減少摩擦。腹膜間皮細胞屬于上皮組織中的單層扁平上皮，是覆蓋于腹膜表面的一層細胞。間皮細胞是構成間皮的細胞，正常大小約為15-25微米，細胞常呈圓形或者卵圓形。其功用是提供潤滑，使器官與器官、器官與胸膜與腹膜間都能得到良好的保護，不會互相磨損受傷。而間皮所生產(chǎn)的潤滑和保護作用就是靠間皮細胞所分泌的物質(zhì)來達成，分泌物多半為細胞外基質(zhì)、玻尿酸類物質(zhì)。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠腹膜間皮采用混合膠原酶消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠腹膜間皮經(jīng)PCK、Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CO)ELISA 試劑盒

Prothrombin fragme F1+2 (F1+2) ELISA Kit 人原片段F1+2(F1+2)檢測試劑盒

HumanCollagenaoaibody,CLAELISAKit 人抗膠原蛋白抗體(CLA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Human1,3-Disphosphoglycerate,1,3-DPG檢測試劑盒人1,3-二0酸甘油酸(1,3-DPG)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母細胞線粒體粗提分離試劑盒10次

MouseAzidothymidine,AZTELISAKit小鼠(AZT)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

IGFBP4重組食蟹猴 IGFBP4 蛋白 Protein

Melan-A/MART-1 黑色素-A(抗原 0.5mgMelan-A/MART-1 黑色素-A(抗原)

PDE9A重組人 PDE9A 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

CBFB Protein Human 重組人 CBFB / CBF-beta 蛋白

KLK7 Protein Mouse 重組小鼠 KLK7 / Kallikrein 7 蛋白

Melan-A/MART-1 黑色素-A(抗原 0.5mgMelan-A/MART-1 黑色素-A(抗原)

CBFB Protein Human 重組人 CBFB / CBF-beta 蛋白

IGFBP4重組食蟹猴 IGFBP4 蛋白 Protein

KLK7 Protein Mouse 重組小鼠 KLK7 / Kallikrein 7 蛋白

PDE9A重組人 PDE9A 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human deoxyribonucleic protein aibody (DNP-Ab) ELISA Kit 人抗脫氧核糖核蛋白抗體(DNP-Ab)檢測試劑盒

Humangasieceptor,GsaRELISAKit 人促胃液素受體(GsaR)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforACA-IgMELISAKit大鼠抗心0脂抗體IgM

藥品乙酸比色法定量檢測試劑盒20次

Mouseoxidizedlowdensitylipoproteinaibody,OLAbELISAKit小鼠氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠腹膜間皮細胞鴨γ干擾素(IFN-γ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

大鼠活化素A受體抗體(ACV-RAb)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

大鼠腦紅蛋白(NGB)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

大鼠血小板生成素(TPO)ELISAKit   ELISA.   96T/48T