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實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

大鼠腎實質分離自腎組織；腎臟是機體的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內代謝產物及某些廢物、毒物，同時經重吸收功能保留水份及其他有用物質，如葡萄糖、蛋白質、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等，以調節水、電解質平衡及維護酸堿平衡。腎臟同時還有內分泌功能，生成腎素、促紅細胞生成素、活性3、前列腺素、激肽等，又為機體部分內分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能，保證了機體內環境的穩定，使新陳代謝得以正常進行。腎臟移植是臨床上治療慢性腎功能衰竭的有效方法，然而這種方法受到供體腎短缺的限制。腎細胞移植可部分解決供體腎短缺的問題，是未來可以替代腎臟移植的方法。因此，體外腎細胞的培養受到國內外有關專家的密切關注。原代腎細胞作為一種常用的腎臟毒理學研究對象，其分離方法主要有機械研磨分離法和酶消化法，酶消化法因對細胞損傷小、分離效果好而優于機械研磨分離法；目前常用的酶消化法主要是消化法和膠原酶消化法。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠腎實質采用膠原酶-混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠腎實質經檢測，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養基重懸細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產品：

大鼠膽囊收縮素八肽(CCK-8)檢測試劑盒 ，英文名： CCK-8 ELISA Kit

Porcine fibrinogen (Fbg) ELISA Kit 豬血纖蛋白原(Fbg)檢測試劑盒

ELISA 小鼠促腎上腺皮質激素(mouse ACTH)  進口分裝

CLIAKitforLPL(Mouselipoproteinlipase)ELISAKit小鼠脂蛋白脂酶

通用腺病毒穿梭載體5微克

ELISAKitIC雞傳染性鼻抗體

Spike重組人 spike glycoprotein 蛋白 (aa 1-760, His 標簽) Protein

TGF beta 2 Propeptide 轉移生長因子–β2前體肽 0.5mgTGF beta 2 Propeptide 轉移生長因子–β2前體肽

PLK1重組人 PLK1 / PLK-1 蛋白 Protein

CD300E Protein Human 重組人 CD300E / IREM-2 蛋白 (Fc 標簽)

PECAM1 Protein Human 重組人 CD31 / PECAM1 蛋白

TGF beta 2 Propeptide 轉移生長因子–β2前體肽 0.5mgTGF beta 2 Propeptide 轉移生長因子–β2前體肽

CD300E Protein Human 重組人 CD300E / IREM-2 蛋白 (Fc 標簽)

Spike重組人 spike glycoprotein 蛋白 (aa 1-760, His 標簽) Protein

PECAM1 Protein Human 重組人 CD31 / PECAM1 蛋白

PLK1重組人 PLK1 / PLK-1 蛋白 Protein

小鼠血小板反應蛋白/敏感蛋白1(TSP-1)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat muscarinic acetylcholine receptor (M-AChR) ELISA Kit 大鼠毒蕈堿型乙酰受體(M-AChR)檢測試劑盒

Humanα-galactosidase,αGALELISAKit 人α半乳糖苷酶(αGAL)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor(Mouseai-IgEreceptoraibody)ELISAKit小鼠抗IgE受體抗體

飲料總乳酸比色法定量檢測試劑盒20次

MouseIerleukin4,IL-4ELISAKit小鼠白介素4(IL-4)檢測試劑盒規格：96T/48T

大鼠腎實質細胞小鼠孕激素/孕(PROG)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠降鈣素(CT)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠脫氫表雄酯(DHEA-S)ELISAKit   ELISA.   96T/48T