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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細胞培養(yǎng)法

對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：人食管癌組織源成纖維細胞

英文名稱：詳見說明書

組織來源：食管癌組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

人食管癌組織源成纖維分離自食管癌組織；食管癌是常見的消化道腫瘤，每年約有30萬人死于食管癌。其發(fā)病率和死亡率各國差異很大。我國是世界上食管癌高發(fā)地區(qū)之一，每年平均病死約15萬人。男多于女，發(fā)病年齡多在40歲以上。食管癌典型的癥狀為進行性咽下困難，先是難咽干的食物，繼而是半流質(zhì)食物，后水和唾液也不能咽下。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的表皮成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

公司實驗室分離的人食管癌組織源成纖維采用-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的人食管癌組織源成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動物細胞的取材是原代細胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應嚴格無菌

③ 防止機械損傷

④ 去除無用組織和避免干燥

⑤ 應注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細胞結(jié)合緊密，不利于各個細胞在體外培養(yǎng)中生長繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細胞解離出來。

(1)懸浮細胞的分離方法

組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。

(2)實體組織材料的分離方法

對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機械分散法

特點:簡便、快速,但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團塊(或糊狀)，應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。

兔核因子κB受體活化因子配基(RANKL)檢測試劑盒

Human ypsin (ypsin) ELISA Kit 人(ypsin)檢測試劑盒

HumanLymeIgGELISAKit 人萊姆IgG(Lyme-IgG)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanglamicaciddecarboxylase,GAD檢測試劑盒人谷脫羧酶(GAD)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織單胺氧化酶A型(MAO-A)活性化學發(fā)光法定量檢測試劑盒20次

HumanMousemyeloperoxidase-aineuophilcytoplasmicaibodyIgG,MPO-ANCAIgGELISAKit人髓過氧化物酶特異性抗中性粒細胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCAIgG)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

LIF重組小鼠 LIF 蛋白 (Fc 標簽) Protein

T-細胞可誘導共刺激分子(ICOS)重組蛋白 Recombinant Inducible T-Cell Co Stimulator (ICOS)

GABARAPL1重組人 ATG8 / GABARAPL1 蛋白 Protein

IRAK4 Protein Human 重組人 IRAK4 / IRAK-4 蛋白

CD2 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD2 蛋白 (Fc 標簽)

鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶Ⅱγ(CAMK2γ)重組蛋白 Recombinant Calcium/Calmodulin Dependent Protein Kinase II Gamma (CAMK2g)

IRAK4 Protein Human 重組人 IRAK4 / IRAK-4 蛋白

CHEK1重組小鼠 CHK1 / CHEK1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

CXCL12 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CXCL12 / SDF-1 蛋白 (Fc 標簽)

BCL2L12重組人 BCL2L12 / BCL2-like 12 蛋白 (GST 標簽) Protein

豚鼠白介素4(IL-4)檢測試劑盒 ，英文名： IL-4 ELISA Kit

Human ai three iodothyronine (3) ELISA Kit 人反三甲狀腺原(3)檢測試劑盒

RabbitoponinⅠ,Tn-ⅠELISAKit 兔肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBeta-EPELISAKit大鼠β內(nèi)啡肽

細菌氧化酶定性檢測試劑盒20次

RabbitGranulocyteColonyStimulatingFactor,G-CSFELISAKit兔粒細胞集落刺激因子(G-CSF)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

人食管癌組織源成纖維細胞人粘膜相關(guān)上皮趨化因子(MEC/CCL28)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人B細胞活化因子受體(BAFF-R)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人血管內(nèi)皮細胞生長因子受體3(VEGFR-3/Flt-4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人血管內(nèi)皮細胞生長因子受體1(VEGFR-1/Flt1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。

1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng),如無法立刻進行復蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。本公司的所有產(chǎn)品僅用于科學研究或者工業(yè)科研等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用