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細胞簡介：

兔關節(jié)囊成纖維分離自關節(jié)囊組織；關節(jié)囊（articular capsule）是由結締組織構成的膜囊，附著于關節(jié)的周圍，密封關節(jié)腔。關節(jié)囊的壁共有兩層：外層為纖維層；內層為滑膜層。纖維層實際上是一個連結骨的骨膜向另一骨骨膜的移行。纖維層厚而堅韌，由致密結締組織構成，含有豐富的血管和神經。其淺層纖維多呈縱行排列；深層纖維主要為環(huán)行纖維。纖維層的厚薄，各個關節(jié)不相同，即是在同一關節(jié)中，各部也不一致一般在運動范圍小的或是負重較大的關節(jié)中，都較厚而緊張，相反，于運動靈活的關節(jié)，則較薄而松弛。有的關節(jié)囊的部分纖維囊缺如，僅一層滑膜層；有的部分明顯增厚，形成韌帶。滑膜層薄而柔潤，是由疏松結締組織構成，襯在纖維層內面，周緣附著在關節(jié)軟骨的邊緣。它朝向關節(jié)腔的內面光而發(fā)亮，此面上蓋有一層內皮細胞。滑膜向關節(jié)腔分泌滑液，滑液是稍粘稠而透明的液體，可減少關節(jié)中相連骨的摩擦，是一種滑潤劑。滑膜表面可形成絨毛或皺襞突入關節(jié)腔內。有時滑膜層可以穿過纖維層呈囊狀向外膨出，形成滑膜囊，常位于肌腱與骨面之間。有時滑膜層突出不明顯，僅呈深窩狀，稱為囊狀隱窩。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來；成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

方法簡介：

實驗室分離的兔關節(jié)囊成纖維采用混合酶消化結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

實驗室分離的兔關節(jié)囊成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：基礎培養(yǎng)基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔關節(jié)囊成纖維體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產品：

小鼠去甲(NE)檢測試劑盒

Human urokinase type plasminogen activator receptor (PLAUR/uPAR) ELISA Kit 人型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)檢測試劑盒

Humanmammaliaargetofrapamyein,mTORELISAKit 人雷帕霉素靶蛋白(mTOR)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

GuineaPigmonocytechemotacticprotein4,MCP-4檢測試劑盒豚鼠單核細胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母細胞可溶性總蛋白制備試劑盒20次

MouseBrainderivedneuroophicfacor,BDNFELISAKit小鼠腦源性神經營養(yǎng)因子(BDNF)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

CD79B重組大鼠 CD79B / B29 蛋白 Protein

FGF1 (aFGF 0.5mgFGF1 (aFGF )(ECGF-beta)(HBGF-1) 肝素結合生長因子( 酸性成纖維細胞生長因子)(多肽片斷抗原)

CCL17重組人 CCL17 / TARC / SCYA17 蛋白 Protein

IL36A Protein Human 重組人 IL1F6 / IL36A 蛋白

EFNA5 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 (Fc 標簽)(Fc 標簽)

FGF1 (aFGF 0.5mgFGF1 (aFGF )(ECGF-beta)(HBGF-1) 肝素結合生長因子( 酸性成纖維細胞生長因子)(多肽片斷抗原)

IL36A Protein Human 重組人 IL1F6 / IL36A 蛋白

CD79B重組大鼠 CD79B / B29 蛋白 Protein

EFNA5 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 (Fc 標簽)(Fc 標簽)

CCL17重組人 CCL17 / TARC / SCYA17 蛋白 Protein

豚鼠膽囊收縮素A受體(CCKAR)檢測試劑盒 ，英文名： CCKAR ELISA Kit

Human cadherln related neuronal receptor 1 (C-1) ELISA Kit 人鈣粘蛋白相關的神經受體1(C-1)檢測試劑盒

rabbitProstaglandinE2,PG-E2ELISAKit 兔子前列腺素E2(PGE2)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforB7-2/sCD86ELISAKit大鼠可溶性CD86

線蟲甲基磺酸甲酯(MMS)誘導突變試劑盒10次

rabbitbasicfibroblastgrowthfactor,bFGFELISAKit兔子堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔關節(jié)囊成纖維細胞人周期素依賴性激酶9(CDK-9)酶聯免疫吸附測定試劑盒   Human CDK9 (Cyclin Depende Kinase 9) ELISA Kit

人周期素依賴性激酶抑制因子2A(CDKN2A)酶聯免疫吸附測定試劑盒   Human CDKN2A (Cyclin Depende Kinase Inhibitor 2A) ELISA Kit

人軸突生長誘向因子1(n1)酶聯免疫吸附測定試劑盒   Human n1 (Nein 1) ELISA Kit

人軸突生長誘向因子4(n4)酶聯免疫吸附測定試劑盒   Human n4 (Nein 4) ELISA Kit

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發(fā)生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。