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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：兔破骨細(xì)胞

英文名稱：Rabbit Osteoclast Cells

組織來(lái)源：骨髓

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

兔破骨分離自骨組織和骨髓；破骨細(xì)胞是骨組織中的多核巨細(xì)胞，位于骨組織表面的淺凹處。目前一般認(rèn)為破骨細(xì)胞是分離自骨骼外的造血系統(tǒng)，其前體可能屬于造血干細(xì)胞的前單核細(xì)胞。破骨細(xì)胞的主要功能是維持骨吸收和骨形成的相對(duì)平衡，若失去這種平衡則發(fā)生病理性變化。因此多數(shù)學(xué)者從破骨細(xì)胞著手研究破骨細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、功能探討骨吸收，形成相互平衡的機(jī)制。但破骨細(xì)胞是一種終末分化細(xì)胞，屬于不增殖細(xì)胞群，不能增殖和傳代，只能進(jìn)行原代培養(yǎng)且存活時(shí)間較短。

實(shí)驗(yàn)室分離的兔破骨采用機(jī)械分離法/密度梯度離心法和骨髓單核細(xì)胞誘導(dǎo)法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的兔破骨經(jīng)TRAP染色檢測(cè)，純度可達(dá)30%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：多核、巨細(xì)胞

傳代特性：屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔破骨體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無(wú)用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開(kāi)，使細(xì)胞解離出來(lái)。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。

小鼠孤兒受體配體   英文名稱：   Mouse Aemin   規(guī)格：      英文縮寫：   A

小鼠α葡萄糖苷酶   英文名稱：   Mouse α Glucosidase   規(guī)格：      英文縮寫：   AG

小鼠雄激素   英文名稱：   Mouse Androgen   規(guī)格：      英文縮寫：   ADG

酰基氧化酶   英文名稱：   Mouse Acyl-CoA oxidase   規(guī)格：      英文縮寫：   ACO

小鼠抗甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human heat shock protein 90 (HSP-90) ELISA Kit 人熱休克蛋白90(HSP-90)試劑盒

HumanCaveolin-1,Cav-1ELISAKIT 人窖蛋白Caveolin1(Cav-1)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

humanangiotensinⅡreceptoypeⅠa,AgⅠa試劑盒人血管緊張素Ⅱ受體Ⅰa型(AgⅠa)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物高內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分離試劑盒10次

Humanβ-subunitsofhemoglobin,HB-βELISAKit人血紅蛋白β亞基(HB-β)試劑盒規(guī)格：96T/48T

EPHA4重組大鼠 EphA4 蛋白 Protein

GLUT12 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白12 0.5mgGLUT12 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白12

STXBP3重組人 STXBP3 / UNC-18C 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

DYDC2 Protein Human 重組人 DYDC2 / DPY30 domain containing 2 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

SRC Protein Mouse 重組小鼠 SRC Kinase / Proto-oncogene c-Src 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

GLUT12 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白12 0.5mgGLUT12 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白12

DYDC2 Protein Human 重組人 DYDC2 / DPY30 domain containing 2 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

EPHA4重組大鼠 EphA4 蛋白 Protein

SRC Protein Mouse 重組小鼠 SRC Kinase / Proto-oncogene c-Src 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

STXBP3重組人 STXBP3 / UNC-18C 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

兔破骨細(xì)胞大鼠抗胰島細(xì)胞抗體(ICA)試劑盒 ，英文名： ICA ELISA Kit

Mouse mucin / mucin 5AC (MUC5AC) ELISA Kit 小鼠粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)試劑盒

RatiactParathormone,i-PTHELISAKit 大鼠全段甲狀旁腺素(i-PTH)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforFS(MouseFollistatin)ELISAKit小鼠卵泡抑素

細(xì)胞環(huán)氧化酶(CYCLOOXYGENASE-2)活性熒光定量試劑盒20次

Ratplasminogenactivatorinhibitor,PAIELISAKit大鼠纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)試劑盒規(guī)格：96T/48T

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。本公司的所有產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)科研等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用