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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠氣管軟骨分離自氣管組織；氣管（Trachea），呼吸器官的一部分；為后壁略平的圓筒型管狀。上端平第六頸椎下緣，與環(huán)狀軟骨相連；向下至第四、五胸椎體（相當(dāng)胸骨角平面）交界處，分左、右主支氣管，分叉處稱(chēng)為氣管杈。氣管主要由14-16個(gè)半環(huán)狀軟骨構(gòu)成，有彈性，軟骨為“C"字形的軟骨環(huán)，缺口向后，各軟骨環(huán)以韌帶連接起來(lái)，環(huán)后方缺口處由平滑肌和致密結(jié)締組織連接，保持了持續(xù)張開(kāi)狀態(tài)。軟骨由軟骨細(xì)胞和細(xì)胞間質(zhì)組成。軟骨內(nèi)的基質(zhì)呈凝膠狀態(tài)，具有較大韌性。軟骨是以支持作用為主的結(jié)締組織。軟骨內(nèi)不含血管和淋巴管，營(yíng)養(yǎng)物由軟骨膜內(nèi)的血管中滲透到細(xì)胞間質(zhì)中，再營(yíng)養(yǎng)骨細(xì)胞。根據(jù)細(xì)胞間質(zhì)的不同可把軟骨分為3種，即透明軟骨、彈性軟骨和纖維軟骨。透明軟骨的基質(zhì)是由膠原纖維、原纖維和周?chē)鸁o(wú)定形的基質(zhì)組成。在胚胎時(shí)期有臨時(shí)支架作用，后來(lái)這種作用被骨代替。成人的透明軟骨主要分布在氣管和支氣管壁中、肋骨的胸骨端和骨的表面（關(guān)節(jié)軟骨）。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠氣管軟骨采用-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠氣管軟骨經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每3-4天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：梭形、多角形

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

小鼠氣管軟骨體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠神經(jīng)疾病靶標(biāo)酯酶(E)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： E ELISA Kit

Mouse plasminogen activator inhibitor 1 (PAI-1) ELISA Kit 小鼠纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)檢測(cè)試劑盒

RatmajorhistocompatibilitycomplexⅠ,MHCⅠ/AgBⅠ/H-1ⅠELISAKit 大鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(lèi)(MHCⅠ/AgBⅠ/H-1Ⅰ)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHbC(HumanHemoglobinC)ELISAKit人血紅蛋白C

細(xì)胞半胱蛋白酶-3(CASPASE-3)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20次

RatVitaminD2,VD2ELISAKit大鼠2(VD2)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

ACVR1重組狗 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 蛋白 Protein

NRF-1(nuclear respiratory factor-1 0.5mgNRF-1(nuclear respiratory factor-1) 核呼吸因子-1抗原

NTRK1重組人 TrkA / NTRK1 蛋白 (aa 285-413, His 標(biāo)簽) Protein

CXCL14 Protein Human 重組人 CXCL14 / BRAK 蛋白

IL36G Protein Mouse 重組小鼠 IL36G / IL1F9 蛋白

NRF-1(nuclear respiratory factor-1 0.5mgNRF-1(nuclear respiratory factor-1) 核呼吸因子-1抗原

CXCL14 Protein Human 重組人 CXCL14 / BRAK 蛋白

ACVR1重組狗 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 蛋白 Protein

IL36G Protein Mouse 重組小鼠 IL36G / IL1F9 蛋白

NTRK1重組人 TrkA / NTRK1 蛋白 (aa 285-413, His 標(biāo)簽) Protein

小鼠流行性出血熱抗體(EHF-Ab)檢測(cè)試劑盒 96T/48T

Rat keratinocyte aocrine factor (KAF) ELISA Kit / amphiregulin (AR) ELISA Kit 大鼠角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子(KAF)檢測(cè)試劑盒/雙調(diào)蛋白(AR)檢測(cè)試劑盒

Humaenascin-R,TN-RELISAKit 人肌腱蛋白R(TN-R)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanActivinA,ACV-A檢測(cè)試劑盒人活化素A(ACV-A)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

脂質(zhì)過(guò)氧化物(linoleicacid)ELISA定量測(cè)定試劑盒48/96次

MouseAndrostenedione,ASDELISAKit小鼠雄烯二同(ASD)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠氣管軟骨細(xì)胞小鼠金屬硫蛋白(MT)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠解偶聯(lián)蛋白1(UCP1)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠解脲脲原體抗體(UU-Ab)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。