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實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡介：

?小鼠腦膜分離自腦膜組織；腦膜是顱骨與腦間的隔膜，一共有三層，由外向內(nèi)為硬腦膜、蛛網(wǎng)膜和軟腦膜。腦膜細(xì)胞圍繞著大腦，參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的正常發(fā)育，能穩(wěn)定腦軟膜表面的細(xì)胞外基質(zhì)、組織放射狀膠質(zhì)細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)和小腦皮層分層結(jié)構(gòu)。

方法簡介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠腦膜采用消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠腦膜經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠游離睪試劑盒   小鼠游離睪試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠游離睪試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠游離睪試劑盒、小鼠游離睪試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠幽門螺旋菌試劑盒   小鼠幽門螺旋菌試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠幽門螺旋菌試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠幽門螺旋菌試劑盒、小鼠幽門螺旋菌試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠抑瘤素M試劑盒   小鼠抑瘤素M試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠抑瘤素M試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠抑瘤素M試劑盒、小鼠抑瘤素M試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠乙型肝核心抗體試劑盒   小鼠乙型肝核心抗體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠乙型肝核心抗體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠乙型肝核心抗體試劑盒、小鼠乙型肝核心抗體試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠血栓素B2(TXB2)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat dopamine (DA) ELISA Kit 大鼠多巴胺(DA)試劑盒

Humanα-HydroxybyrateDehydrogenase,αHBDHELISAKit 人α羥基脫輕酶(αHBDH)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitfor(LDH)ELISAKit大鼠乳酸脫氫酶

熒光標(biāo)記法細(xì)胞端粒酶活性AP電泳分析試劑盒10次

MouseIerleukin23,IL-23ELISAKit小鼠白介素23(IL-23)試劑盒規(guī)格：96T/48T

FGF9重組狗 FGF9 / FGF-9 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

NIK，NF-kappaB-Inducing Kinase NFkB誘導(dǎo)的激酶(抗原 0.5mgNIK，NF-kappaB-Inducing Kinase NFkB誘導(dǎo)的激酶(抗原)

PDE1B重組人 PDE1B 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

CD33 Protein Human 重組人 CD33 / Siglec-3 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

PTN Protein Mouse 重組小鼠 Pleiotrophin / PTN / HB-GAM 蛋白

NIK，NF-kappaB-Inducing Kinase NFkB誘導(dǎo)的激酶(抗原 0.5mgNIK，NF-kappaB-Inducing Kinase NFkB誘導(dǎo)的激酶(抗原)

CD33 Protein Human 重組人 CD33 / Siglec-3 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

FGF9重組狗 FGF9 / FGF-9 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

PTN Protein Mouse 重組小鼠 Pleiotrophin / PTN / HB-GAM 蛋白

PDE1B重組人 PDE1B 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

小鼠腦膜細(xì)胞大鼠甘露糖結(jié)合蛋白/甘露糖結(jié)合凝集素(MBP/MBL)試劑盒 ，英文名： MBP/MBL ELISA Kit

Porcine esadiol (E2) ELISA Kit 豬雌二醇(E2)試劑盒

瘧原蟲(Pm)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforM-CSF(HumanMacrophageColony-StimulatingFactor)ELISAkit人巨噬細(xì)胞集落刺激因子

體液砷元素比色法定量試劑盒20次

ELISAKitC3bR綿羊補(bǔ)體片段3b受體